Norgen Biotek細胞質RNA和細胞核RNA實驗操作指南

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細胞質和細胞核RNA提取試劑盒

Cytoplasmic & Nuclear RNA Purification Kit

貨號：21000

懸浮細胞和被提起懸浮的細胞（For cells growing in suspension and lifted cells）

00:00~00:56

• 您好，您正在收看Norgen Biotek。今天，我們將提供有關細胞質和細胞核RNA純化試劑盒（產品貨號：21000）的分步工作流程的教程，該教程適用于在懸浮細胞和被提起懸浮的細胞。

• 為了避免樣品污染，建議在開始前先用1%的漂白劑消毒工作區域和儀器，然后70%乙醇擦拭。

• 您的試劑盒包括：詳細的產品說明書，Lysis Buffer J（裂解緩沖液J），Buffer SK（緩沖液SK），Wash Solution A（洗滌液A），Elution Buffer E（洗脫液E），Spin Columns（離心柱），Collection Tubes（收集管）和1.7 mL Elution tubes（1.7 mL洗脫管）。

• 在開始前，確保把Lysis Buffer J放在-20℃的冰箱中10到15分鐘，并在使用前取出。這是為了確保細胞質和細胞核RNA的分離。

00:58

第1步：細胞組分的制備

Step 1: Cell Fractions Preparation

01:02~02:55

1. 將細胞懸液轉移至無RNase的試管，并以不超過200 g或2000 RPM的速度離心10分鐘以沉淀細胞。01:16~01:23

2. 小心倒出上清液。為了確保沉淀物不會脫落，可能會在沉淀物中留下幾微升的培養基。

3. 在沉淀中加入200 uL冰冷的Lysis Buffer J。

4. 通過渦旋15秒來裂解細胞。在進行下一步之前，請確保整個沉淀完全溶解。使用移液器將裂解液轉移至無RNase的微量離心管。

5. 在臺式離心機中以最大速度旋轉裂解液10分鐘。

6. 使用帶有小槍頭的移液器，將包含細胞質RNA的上清液轉移至另一個無RNase的試管。

7. 細胞核RNA組分（沉淀）非常粘稠，可能很松散，因此，強烈建議使用較小的移液器槍頭來轉移細胞質部分，避免將細胞核RNA組分（沉淀）移出或轉移到細胞質部分中。

8. 如果需要提取細胞核RNA，則保留含有細胞核RNA的沉淀。

9. 為了確保沉淀微球不被移出，可以在沉淀物中留下幾微升的Lysis Buffer J。立即繼續執行步驟2。

02:58

第2A步：將細胞質RNA與柱結合

Step 2A: Binding Cytoplasmic RNA to Column

03:02~03:43

1. 向前一步的上清液（細胞質RNA組分）中加入200 ?L Buffer SK。渦旋混合10秒鐘。

2. 向混合物中加入200 uL 96-100％乙醇。渦旋混合10秒鐘。

3. 將混合物加到已與收集管組裝在一起的離心柱上，并以3500 g或6000 RPM離心1分鐘。

4. 丟棄流通液，重新組裝離心柱及其收集管。

03:45

第2B步：將細胞核RNA與柱結合

Step 2B: Binding Nuclear RNA to Column

03:48~04:27

1. 將400 uL Buffer SK添加到沉淀（細胞核RNA組分）中。渦旋混合10秒鐘。

2. 向混合物中加入200 uL 96-100％乙醇。渦旋混合10秒鐘。

3. 將混合物加到已與收集管組裝在一起的第二個離心柱上，并以3500 g或6000 RPM離心1分鐘。

4. 丟棄流通液，重新組裝離心柱及其收集管。

04:29

第3步：柱洗

Step 3: Column Wash

04:32~05:04

1. 將400μL Wash Solution A加入離心柱并離心1分鐘。

2. 丟棄流通液。重復這一步驟兩次，總共洗三次。

3. 旋轉離心柱2分鐘，以徹底干燥樹脂。丟棄收集管。

05:06

第4步：RNA洗脫

Step 4: RNA Elution

05:08~05:33

1. 將離心柱放入試劑盒中提供的新的1.7 mL洗脫管中。將50 uL Elution Buffer E加到離心柱中。

2. 以200 g或2000 RPM離心2分鐘，然后以14000 g或14000 RPM離心1分鐘。

05:36

第5步：RNA的保存

Step 5: Storage of RNA

05:39~05:49

純化的RNA樣品可以在–20°C下保存幾天。建議樣品應置于–70°C進行長期保存。

感謝您觀看本教程，希望這個操作指南能夠幫助到大家，如果你喜歡這個視頻，歡迎大家踴躍分享它。