· ELISA比色法實驗顯色，是一個酶催化的實驗。在一定范圍內，環境溫度越高，酶活性越強，相同孵育時間內，溫度高的，檢測數據高。相同溫度，孵育時間長的，檢測數據高。

· 說明書的標曲只是一個參考用途，展示大概的結果形式。不能直接使用，否則，試劑盒就沒有必要提供標準品了，客戶直接用說明書的曲線來計算了，對吧?！久看螌嶒?，當時都需要做標準曲線，才是最準確的方法】

· 標準曲線是否良好？ 客戶可以繪制相應的擬合曲線（線性，或者曲線形式），R2大于0.9以上是可以接受的，0.99那就是非常好，小數點后面9越多越好。

* 試劑盒規格的48或者96，通常代表的是反應次數或者孔的數量。而不是樣品數量。（標準品，對照都會參與到反應或者加入到孔中，因此樣品數量肯定會少）

試劑盒做一次實驗，需要客戶做：6個標準品（標準品數量，根據各個說明書里面說的來設置，6個濃度點）+ 一個空白孔（標準含量為0） = 7。通常每個實驗都要做復孔（最少2個復孔，也有做3個復孔的。2個復孔意味著1個東西，需要加到2個孔，統計學需求，算平均值等），這么一來被占用的孔就是7*2=14個孔。96-14=82個孔，只有這82個孔可以給客戶拿去測試他的樣品。如果也算是復孔，那么就是82/2=41個樣品。這是最多可以測試多少樣品。

總結：

【2個復孔】樣品數量= [ 96 - （標準品數量+對照組數量）*2] / 2

【3個復孔】樣品數量= [ 96 - （標準品數量+對照組數量）*3] / 3

#強調#：標準品的數量，陽性對照，陰性對照 的設置，根據說明書來，有些試劑盒是沒有陽性對照的。

以上為一次性將試劑盒用完的樣品數量。如果客戶要做2次實驗，需要繪制2次標曲。對應的，繼續相減。

1. 主要涉及ATP類的試劑盒，消耗能量ATP，發光（螢火蟲）。

2. 主要的實驗：熒光素酶分析實驗。

使用儀器：

1. 化學發光儀，

2. 光度計（Luminometer），

3. 多功能酶標儀（含化學發光，生物發光檢測模塊）。

1.試劑盒使用前，通常需要在室溫下平衡30-60min。(溫度對酶催化反應有影響）。

2.洗板時需保證微孔板平放，將洗滌液注滿各孔，但盡量避免漏液溢液，以每孔300 μl為宜；板洗次數一般為3次，要保證洗板的浸泡時間，每次浸泡時間一般為30-60 秒；盡量減少洗液殘留量，推薦每次洗板后進行拍板，并及時更換吸水紙，避免吸水紙的碎屑粘到反應孔內。

比色法：特定波長光穿透樣品，光被吸收的情況。（酶標儀）（分光光度計）

熒光法：特定波長光，激發染料，發出其它波長光的情況。（熒光/多功能，酶標儀）