Nanoprobes膠體金特色替代品：納米金(Nanogold?)標記

一、膠體金標記：

膠體金（colloidal gold），又稱金溶膠（gold solution），是指分散相粒子直徑在1—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標記物用于免疫組織化學，近10多年來膠體金標記已經發展為一項重要的免疫標記技術。膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫學等許多領域的研究已經得到發展，并越來越受到相關研究領域的重視。

常規膠體金尺寸的選擇取決于還原劑：

• ①硫氰酸鹽：6nm

• ②乙醇：10nm

• ③白磷：3nm

• ④檸檬酸鈉：12-64nm

• ⑤檸檬酸+單寧酸：3-17nm

膠體金結合方式：

• ①通過電荷結合：當帶正電荷的基團附著在帶負電荷的[AuCl₂]-金表面時，蛋白質與膠體金結合。

• ②通過疏水相互作用結合：膠體金具有疏水性質，可以結合疏水域，例如抗體Fc區域的疏水域。

• ③通過巰基配位結合：巰基（-SH）對金有很強的親和力。蛋白質可以通過半胱氨酸殘基結合，核酸可以通過合成巰基修飾結合。

膠體金標記的局限性：

• ①標記物的種類有限：能帶上膠體金標記的物質僅限于抗體、蛋白質（鏈霉親和素、Protein A、Protein G）、部分肽以及巰基修飾的寡核苷酸結合物。

• ②容易跟共軛物解離：結合蛋白可以解離并與標記蛋白競爭以實現目標結合，減少標記。

• ③容易發生聚集：膠體金結合物會聚集在一起。

• ④容易產生背景：暴露的金表面可以與細胞和組織發生非特異性結合。

• ⑤探針體積大：膠體金需要額外的大分子（如BSA）來穩定，探針更大會阻礙標記物在樣本中的滲透

• ⑥共軛位點非特異性：難以控制結合的幾何形狀和化學計量。

二、納米金（Nanogold?）標記

Nanogold^④是一種與眾不同的金標記。與常規膠體金相比，它在顯微鏡上的性能得到了改善，對其連接方式和位置明確可控使其成為納米生物技術和納米結構材料等眾多新領域中的理想選擇。

1.4 nm Nanogold^? 顆粒是一種離散的金化合物。因為它是一種單一的化合物，所以大小非常均勻，而最常用的“1nm”膠體金實際上在1到3nm之間，其化學和光譜性質高度一致。

膠體金（A）和Nanogold尺寸比較：Nanogold尺寸較膠體金小很多，不會影響抗原/抗體表位	Nanogold（A）和膠體金標記結果比較：Nanogold顯示出良好分辨率及對比度

與傳統的膠體金不同，它不吸附在蛋白質上，而是在溫和的緩沖條件下，在結構內精準定位與特定的化學基團共價結合。Nanogold^?可通過多種不同的反應進行共軛，并可用于標記具有適當反應基團的任何分子。Nanogold?已被用于標記寡核苷酸、脂質、肽、蛋白質、酶抑制劑、底物類似物和其他小分子。

Nanogold^?共軛物是一種定義明確的分子，在各種緩沖液和pH條件下都是穩定的，可以通過色譜純化。

Nanogold^?是一系列具有不同化學反應性的標記試劑。你可以使用這些獨特的產品來標記你自己的生物分子、大分子、納米結構材料或表面。Nanogold^?-抗體IgG、Fab'和蛋白質結合物也可提供。

雖然1.4 nm Nanogold^?是最小的電鏡（EM）探針之一，但僅需短暫使用的銀/金增強試劑（LI-silver，HQ-silve或金增強）以產生2-30 nm（取決于顯影時間）或更大尺寸的高可見顆粒。長時間孵育產生在光學顯微鏡中容易看到的密集、視覺清晰的黑色信號。這也為SDS-PAGE、免疫印跡和Western blots提供了高度敏感和特異的檢測和可視化選擇。

Nanogold?卓越性能：

• ①尺寸小，滲透性能好：不需要額外的大分子，分辨率更高，能滲透進入40?m的組織。

• ②選擇性廣：能用合適的反應基團標記任何分子。

• ③顆粒均勻：極其均勻的1.4nm金顆粒，無交聯和聚集現象。

• ④位點特異性：特定位點標記，不影響共軛物的生物活性。

• ⑥高穩定性：共軛物在各pH值和離子強度下均表現穩定，有較長的保質期。

• ⑦低背景：最小的非特異性結合。 

三、我們能提供的Nanogold?種類：

①納米金結合物：共價結合了Fab’/IgG/鏈酶親和素/熒光/脂質/不同反應基團的納米金，是市面上最小的免疫金標探針，各方面性能均優于膠體金。

應用類型及實例：

• 1）原位雜交（ISH）

• 2）電子顯微鏡

• 3）光學顯微鏡和共聚焦顯微鏡

• 4）免疫層析/側向流動

• 5）免疫印跡和IHC

• 6）凝膠染色Nanogold標記條帶

ISH（原位雜交）檢測：SiHa細胞中HPV 16的單拷貝	電鏡檢測：單馬來酰亞胺標記的Nanogold(箭頭)特異性結合在IgG分子上鉸鏈的硫醇位點。
光學顯微鏡檢測：紡錘體Tubulin標記，左：膠體金標記；右：Nanogold（納米金）	免疫印跡檢測：Nanogold?-抗小鼠Fab'檢測小鼠IgG，實現了前所未有的靈敏度（0.1pg靈敏度）
側向流動/免疫層析：開發快速檢測試紙條

Nanogold?優點：

• ①金顆粒與Fab’或IgG比例接近1

• ②粒徑?。?nm），且均勻

• ③低背景

• ⑥靈敏度高

• ⑦穩定

產品推薦：

標記上納米金（Nanogold?）的二抗及鏈霉親和素：

同時標記上納米金（Nanogold）和熒光的二抗：

標記上納米金（Nanogold）的脂類：

帶不同反應基團的納米金（Nanogold）顆粒：

② 3-5nm/2-4nm/0.8nm/1.4nm， 帶正電/負電/不帶電荷，親水/疏水的納米金顆粒：用帶化學基團的不同配基包被和穩定，溶解性不同

應用：在多種系統和環境中的應用廣泛

產品推薦：

③ Undecagold (Au11)：比納米金（Nanogold）小，直徑僅0.8nm。適用于*高分辨率電鏡（如掃描透射電鏡）或透射電鏡與圖像處理結合的技術。單個聚合物在TEM下通常不能被直接觀測到，染色更慢，與納米金相比，銀沉積的量更少。因此在很多應用中，建議選用納米金而非Undecagold。

產品推薦：

Nanoprobes公司成立于1990年，專門生產免疫金標記和免疫測定試驗產品。主要為廣大科研機構提供用于檢測生物分子的最靈敏的試劑和技術。Nanoprobes公司獨特的金標技術使用化學交聯的金屬簇和納米顆粒作為標簽。與膠體金顆粒靜電吸附在抗體和蛋白質上的傳統免疫金探針不同，Nanoprobes公司的金標是與生物分子在特定位點交聯的不帶電荷的分子，故其探針具有膠體金不具備的范圍和靈活性。Nanoprobes標簽可以附著在任何帶有反應基團的分子上，比如蛋白質、多肽、寡核苷酸、小分子和脂類等，以檢測和定位這些分子。其金標也可以和其他標簽結合，一起使用。Nanoprobes獨特的熒光納米金探針在一個探針中結合了納米金（Nanogold?）和熒光素，用于熒光和電鏡兩種技術共同進行樣品成像。

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